猪弓形虫重组MIC3蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.10.016

畜牧兽医学报 ›› 2013, Vol. 44 ›› Issue (10): 1622-1628.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.10.016

猪弓形虫重组MIC3蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

白昀^1,2，王海燕¹，王占伟^1,2，纪燕³，吴叙苏¹，刘冬霞¹，邵国青^1*

（1. 江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京210014；2. 南京天邦生物科技有限公司，南京211102；3.南京农业大学，南京210095）

收稿日期:2013-04-19 出版日期:2013-10-23 发布日期:2013-10-23
通讯作者: 邵国青，Tel：025-84391973，E-mail：84391973@163.com
作者简介:白昀(1980-)，男，陕西华阴人，助理研究员，硕士，主要从事动物流行病学研究，E-mail：sunnybaiy@sina.com
基金资助:
江苏省科技支撑计划（社会发展）项目（BE2010758）

Preparation and Preliminary Application of Monoclonal Antibodies against rMIC3 of Toxoplasma gondii

BAI Yun^1,2, WANG Hai-yan¹, WANG Zhan-wei^1,2, JI Yan³, WU Xu-su¹,LIU Dong-xia¹, SHAO Guo-qing^1*

(1. Key Laboratory of Animal Diseases Diagnostic and Immunology of Ministry of Agriculture·National Center for Engineering Research of Veterinary Bio-products, Institute of Veterinary Medicine, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China；2. Nanjing Tianbang Bio-industry Co. Ltd, Nanjing 211102, China； 3. Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)

Received:2013-04-19 Online:2013-10-23 Published:2013-10-23

摘要/Abstract

摘要：

为获得针对猪弓形虫MIC3蛋白的单克隆抗体，为进一步研制免疫金标试纸条提供材料，作者以纯化的重组MIC3蛋白免疫BALB/c小鼠，运用杂交瘤技术制备单克隆抗体（McAb）。经ELISA 筛选阳性克隆和亚克隆建株，体内诱生腹水法制备McAb，测定其亚类、效价，进行Western blot分析，并利用胶体金颗粒标记的McAb制备免疫金标试纸条。成功制备了2株稳定分泌抗MIC3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株B7和D3，2株McAb的免疫球蛋白亚类均为IgG2a，其ELISA腹水效价分别为1∶64万和1∶192万，Western blot结果表明, 2株McAbs腹水均能分别与纯化的重组MIC3蛋白和猪弓形虫全虫蛋白中大小为56和38 ku左右的蛋白发生特异性反应；用纯化后McAb标记的胶体金颗粒制备的免疫金标试纸条可以检测到最低浓度为4×10⁴ CFU·mL^－1的弓形虫速殖子。本研究为猪弓形虫病的现场诊断提供了有效的方法，显示出很好的临床应用前景。

Abstract:

MIC3 has high immunoreactivity, and plays an important role in recognition, adhesion and invasion for Toxoplasma gondii to host cells. To prepare the monoclonal antibody (McAbs) against recombinant MIC3 (rMIC3) of T. gondii, we expressed rMIC3 in Escherichia coli, and purified rMIC3 was immunized to BALB/c mice. B lymphocytes hybridization technique was applied to prepare the aimed McAb. Positive clones were screened with ELISA, and then were subcloned to establish stable cell lines. Ascites were induced to produce the McAbs, and its specificity was identified by Western blot analysis. The gold immunochromatographic lateral flow assay system was developed. The results indicated that two stable hybridoma cell lines (B7 and D3) were obtained. The McAbs subclasses all belong to IgG2a and their ELISA titers of the ascite fluid were 1:640 000 and 1:1920 000, respectively. Western blotting analysis confirmed that the two McAbs all can identify the protein MIC3 from lysed tachyzoites and purified rMIC3. Purified polyclone antibody D3 was labeled with colloidal gold particle, and the minimum detectable limit of tachyzoite was 4×10⁴ CFU·mL^－1. This study laid the foundation for further study on related applications.

中图分类号:

S852.7

白昀，王海燕，王占伟，纪燕，吴叙苏，刘冬霞，邵国青. 猪弓形虫重组MIC3蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2013, 44(10): 1622-1628.

BAI Yun, WANG Hai-yan, WANG Zhan-wei, JI Yan, WU Xu-su,LIU Dong-xia, SHAO Guo-qing. Preparation and Preliminary Application of Monoclonal Antibodies against rMIC3 of Toxoplasma gondii[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2013, 44(10): 1622-1628.

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Preparation and Preliminary Application of Monoclonal Antibodies against rMIC3 of Toxoplasma gondii

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